霉菌和酵母计数操作细则

　　一、设备和材料

　　1、温箱:25~28℃。

　　2、振动器。

　　3、天平。

　　4、显微镜。

　　5、玻璃塞三角瓶:300mL。

　　6、试管:15毫米×150毫米。

　　7、平盘:直径9cm。

　　8、吸管:1mL和10mL。

　　9、酒精灯。

　　10、载物玻璃片。

　　11、盖玻璃片。

　　12、广口瓶。

　　13、牛皮纸袋:121℃灭菌20分钟。

　　14、金属勺、刀等。

　　15、试管架。

　　16、接种针。

　　17、橡胶乳头。

　　二、培养基和试剂

　　1、土豆-葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素，按GB478928479规定。

　　2、孟加拉红培养基:按GB478928481规定。

　　3、灭菌蒸馏水。2的双曲馀弦值。2的双曲馀弦值。

　　4、乙醇。

　　三、操作步骤

　　1、采样:采样时要特别注意样品的代表性，避免采样时的污染。

　　首先，准备灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶、金属刀或勺子。在卫生学调查的基础上，采取代表性样本。采样后应尽快检查，否则应放在低温干燥处。粮食(包括粮食仓库粮食、粮食店和家庭小量粮食)样品的采集，根据粮食囤积和粮食堆积的大小和类型，可以分层定点采样，一般分为三层五点，或者分层随机采用不同点的样品，充分混合后，可以取500g左右进行检查。少量粮食可以用金属勺子取上、中、下各部分的混合样品。谷物加工产品(包括熟食、点心、面包等)、发酵食品、乳制品和其他液体食品，用灭菌工具收集可疑霉菌食品250g，放入灭菌容器进行检查。

　　2、用无菌操作取样25g(或25mL)，放入含有225mL灭菌水的玻璃塞三角瓶中，振动30min，即1:10稀释液。

　　3、用灭菌吸管吸取1:10稀释液10mL，注入试管，另用带橡胶乳头的1mL灭菌吸管反复吹50次，使霉菌孢子充分散开。

　　4、取1mL1:10稀释液注入含9mL灭菌水的试管，另一根1mL灭菌吸管吹5次，该液为1:100稀释液。

　　5、按上述操作顺序制作10倍稀释液，每次稀释1次，更换1mL灭菌吸管，根据样品污染情况的估算，选择3个适当的稀释度，在分别稀释10倍的同时，将1mL稀释液吸入灭菌盘，每个稀释度制作2个盘，冷却到45℃左右的培养基注入盘，琼脂凝固后，倒置在25~28℃的箱子里，3d后开始观察，共培养观察5d。

　　6、计算方法:通常选择菌落数在10~150之间的盘子进行计算，稀释度的2个盘子的菌落平均数乘以稀释倍数，即每克(或毫升)样品中含有的霉菌和酵母数。

　　7、报告:每克(或毫升)食品中含有的霉菌和酵母数以个/g(个/mL)表示。